JURNAL PRAKTIKUM KIMIA ORGANIK KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DAN KOLOM

JURNAL PRAKTIKUM  
KIMIA ORGANIK I

"Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom"

DISUSUN OLEH:

MIRNAWATI
 (A1C117013)

DOSEN PENGAMPU
Dr. Drs. SYAMSURIZAL, M.Pd.

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI   

2019

PERCOBAAN KE-8

I.                   JUDUL

“Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom”

II.                HARI/TANGGAL

Kamis / 18 April 2019

III.             TUJUAN

Adapun tujuan dari dilakukannya percobaan ini adalah sebagai berikut:

1.      Dapat mengetahui teknik-teknik dasar kromatografi lapis tipis dan kolom

2.      Dapat membuat plat kromatografi lapis tipis dan kolom kromatografi

3.   Dapat memisahkan suatu senyawa dari campurannya dengan kromatografi lapis tipis dan memurnikannya dengan kolom

4.      Dapat memisahkan pigmen tumbuhan dengan cara kromatografi kolom

IV.             LANDASAN TEORI

Kromatografi adalah salah satu dari teknik pemisahan dalam analisis kimia yang biasa lebih dikenal dengan fase diam dan fase gerak. Kromatografi ialah teknik dalam analisis kimia yang bertujuan untuk memisahkan campuran zat menjadi komponen atau partikel-partikel penyusun dari campuran tersebut, lalu komponen yang didapatkan akan dianalisis satu persatu. Jenis pemisahan berdasarkan kromatografi ini dapat dibedakan menjadi beberapa jenis yaitu kromatografi lapis tipis, kromatografi cair, kromatografi penukar ion, kromatografi afinitas. Walaupun kromatografi ini terbagi dalam beberapa jenis namun pada prinsip dasarnya tetap sama satu dan lainnya. Dalam pemisahan secara kromatografi, ada beberapa istilah yang digunakan, yaitu sebagai berikut:

Istilah penting	Pengertian
Fase gerak/pengemban	Fase gerak yang dimaksud adalah pelarut organik yang digunakan yang mengalir didalam kolom
Fase diam/adsorben	Fase diam yang dimaksud adalah zat padat yang menempel pada lapisan plat atau kaca, jenis fase diam yang digunakan tergantung pada kromatografi yang digunakan. Contoh: silika gel, selulosa, dan dedosil sulfat.
Eluen	Eluen adalah campuran dari pelarut yang merambat pada kolo, lapis tipis, atau kertas.
Eluat	Eluat adalah cairan yang keluar dari kolom yang membawa komponen dari campuran yang akan dipisahkan.
Elusi	Elusi adalah proses pemisahan komponen dari campuran dengan cara menambahkan kombinasi pelarut tertentu.
Analit	Komponen yang telah memisahkan diri dari campuran.

           

Adapun prinsip dari pemisahan kromatografi adalah didalam suatu campuran yang terdiri dari komponen-komponen zat tertentu dimana komponen tersebut terletak pada perbedaan afinitas atau gaya adesi dari setiap jenis analit terhadap fase diam dan fase gerak, oleh karena itu komponen-komponen tersebut dapat terpisah dari campurannya. Penentuan afinitas dari suatu analit dapat kita tetapkan dengan melihat daya adsorpsinya terhadap fase diam dan kelarutan analit tersebut terhadap fase gerak yang digunakan atau yang dipakai(http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/).

Kromatografi adalah teknik pemisahan suatu komponen berdasarkan pendistribusian zat antara dua fase, yaitu fase diam (stasioner) dan fase gerak (mobile). Kromatografi ini memiliki azas penting, azas penting tersebut adalah pada senyawa yang berbeda juga memiliki koefisien yang berbeda diantara kedua fase tersebut. Ada dua kemungkinan yang terjadi pada senyawa-senyawa tersebut yaitu senyawa yang berinteraksi secara lemah dan senyawa yang berinteraksi secara kuat. Untuk senyawa yang beriteraksi secara kuat dengan fase diam akan bergerak lambat, dan untuk senyawa yang berinteraksi secara lemah dengan fase diam akan bergerak lebih cepat dan akan lebih lama tertinggal dalam fase gerak dalam sistem kromatografi. Pada dasarnya, setiap komponen yang ada dalam campuran senyawa ini bergerak dengan kecepatan yang berbeda-beda pada sistem kromatografi, oleh karena itu akan dihasilkan pemisahan yang sempurna. Kromatografi dapat dibedakan menjadi beberapa macam, yaitu kromatografi lapis tipi (TLC), kromatografi kolom, kromatografi gas (GC), dan lain sebagainya. Kromatografi yang pertama adalah kromatografi lapis tiis (TLC ;Thin Layer Chromatography), pada kromatografi ini bahan penyerapnya dilekatkan tersebar pada plat kaca, alumunium, atau plastik. Kromatografi tipis ini memiliki kelebihan yang tidak dimiliki oleh jenis kromatografi yang lain yaitu pada sistem pengerjaannya lebih cepat, kebutuhan bahan  dapat disesuaikan dengan keperluan  dan pemisahan yang dilakukan baik. Sedangkan untuk kromatografi kolom itu sendiri adalah teknik kromatografi yang penting untuk skala preparatif, dari beberapa miligram samapi puluhan gram. Pada kromatografi kolom ini pemisahannya digunakan dengan menggunakan kolom kaca yang diisi dengan bahan penjerap. Oleh karena itu kromatografi ini dinamakan kromatografi kolom. Cara melakukan pemisahan ini adalah dengan cara memasukkan campuran yang akan dipisahkan dibagian atas timbunan penjerap, dimana semua campuran ini akan terjerap semuanya. Dalam kromatografi ada istilah eluen, eluen adalah fase gerak yang dialirkan terus-menerus melalui bahan penjerap. Semua zat yang berada didalam campuran tersebut akan ikut turun dengan kecepatan yang berbeda-beda, hal ini bergantung pada afinitasnya terhadap penjerap (Tim Kimia Organik, 2016).

      Teknik kromatografi kolom terbuka (KLT) pertama kali dikembangkan oleh Ismailoff dan Schaiber pada tahun 1938. Pada teknik pemisahan ini ada yang dinamakan dengan adsorben dan adsorbat. Adsorben adalah zat digunakan untuk menyerap partikel atau molekul yang ada didalam suatu zat. Sedangkan adsorbat adalah zat yang akan diserap. Pada kromatografi kolom terbuka ini adsorben dilapiskan diatas lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang fase diam. Kromatografi kolom terbuka adalah kromatografi dimana fasa bergerak ini akan berjalan sepanjang terjadinya fase diam hingga terbentuknya kromatografi. kromatografi kolom ini adalah metode kromatografi yang sederhana, cepat dalam melakukan pemisahan dan mudah untuk didapatkannya senyawa-senyawa yang terpisah. Adapun pelapis yang sering digunakan pada kromatografi kolom ini adalah silici gel, namun terkadang juga digunakan bubuk selulosa (Khopkar, 2010).

      Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan yang terdiri dari dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam (Stationer Phase) adalah salah satu fase yang penting karena dengan adanya fase diam ini didapatkannya perbedaan waktu retensi (Rf) dan terpisahnya komponen senyawa analit dari sampel tersebut. contoh dari fase diam adalah berupa bahan atau porous (berpori) yang berbentuk molekul kecil atau cairan yang pada dasarnya bahan tersebut dilapisi oleh padatan pendukung. Sedangkan fase gerak adalah fase yang membawa analit, fase gerak ini dapat bersifat inert ataupun berinteraksi dengan analit. Pada dasarnya fase gerak yang ada tidak selalu berbentuk cairan, ada juga fase gerak yang berbentuk gas, gas yang digunakan yaitu sebagai carrier gas senyawa yang bersifat volatil atau mudah menguap, namun kebanyakan dari penelitian menggunakan fase geraknya  adalah berupa cairan (Krisma, 2010).

       

      Pada teknik pemisahan dengan cara kromatografi ini setelah dilakukan proses kromatografi yaitu dari proses penotolan noda pada plat, kemudian pengujian dengan eluen langkah selajutnya adalah mendeteksi noda yang telah didapatkan. Dalam hal ini pendeteksian noda pada kromatografi lapis tipis (KLT) lebih mudah dilakukan jika dibandingkan dengan kromatografi kertas. Dalam pendeteksian ini dapat dilakukan dengan menggunakan teknik-teknik umum yang biasanya dilakukan. Jika didapatkan noda yang tidak berwarna atau berpendar jika dikenai oleh sinar ultraviolet dapat ditempatkan dengan cara yaitu mendidihkan papan pengembang pada larutan iod. Sehingga nantinya uap iod tersebut akan berinteraksi dengan komponen sampel yang terbentuk baik berdasarkan kelarutan membentuk warna atau secara kimiawinya (Soebagio, 2000).

     

V.                ALAT dan BAHAN

Adapun alat dan bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah sebagai berikut:

5.1  Alat

-          Plat TLC                                       - Erlenmeyer

-          Gelas piala                                     - Pipa kapiler

-          Dryer                                             - Bejana pengembang

-          Kolom kromatografi                     - Lampu UV

-          Glass wool                                    - Tabung reaksi

-          Pengaduk                                      - Pipet tetes

-          Pensil                                             - Glass wol

5.2  Bahan

-          Metanol                                         - Etanol

-          Etil-asetat                                      - Kloroform

-          n-heksan                                        - Aseton

-          Ekstrak tanaman                           - Serium sulfat

-          Ekstrak daun                                 - Silika gel

-          Asam asetat                                   - Larutan pengembang

VI.             PROSEDUR KERJA

6.1  Kromatografi Lapis Tipis

1.     Disiapkan Plat TLC

2.   Dibuat larutan pengembang dalam gelas piala 1L  dengan komposisi Etanol : Metanol : Kloroform     : Etil- Asetat : n-heksan : Aseton ( 40 : 68 : 108 : 115 : 140 : 152 ) ml

3.      Dibuat 10 larutan sampel daari 10 ekstrak tanaman dengan 5 ml metanol

4.   Diambil masing-masing larutan sampel yang sudah di ekstrak dibubuhkan (  ditotolkan ) diatas pelat TLC dengan jarak kira-kira 1cm dari tepi pelat kaca.

5.      Dikeringkan noda sampel dan standard dengan dryer (ditiup).

6.      Dimasukkan pelat ke dalam bejana pengembang

7.    Dibiarkan proses ini berlangsung sampai garis dmencapai 1 cm dari tepi atas pelat.

8.   Diangkat pelat dari bejana, lihat noda dengan lampu UV atau dibuat larutan dengann serium sulfat

9.     Dihitung dan bandingkan semua Rf yang diperoleh.

6.2  Kromatografi KolomDi

1.      Disiapkan 10 ekstrak daun

2.      Disiapkan kolom kromatografi

3.      Disumbat bagian bawah kolom dengan glass wool.

4.      Dimasukkan silika gel kedalam larutan pengembang yang telah dibuat di awal.

5.      Dimasukkan tersebut kemudian kedalam kromatografi kolom.

6.      Dimasukkan sampel yang akan di kromatografi

7.      Diteteskan pelarut secara terus- menerus kedalam kolom

8.   Ditampung tetesan yang keluar dari kolom dengan beberapa tabung reaksi bersih dan dipisahkan berdasarkan warnanya.

Dibawah ini merupakan video percobaan yang terkait dengan kromatografi:

 http://youtu.be/OZKuZ_w2Fg0

Adapun permasalahan yang muncul berdasarkan video tersebut adalah sebagai berikut:

1.    Dari video tersebut dapat kita ketahui prinsip kerja dari kromatografi, apakah prinsip kerja tersebut?

2.  Dari video tersebut dijelaskan bahwa eluen yang akan digunakan pada proses kromatografi adalah eluen yang telah dijenuhkan. Bagaimana cara melihat eluen tersebut telah jenuh atau tidak?

3.  Pada video tersebut saat ingin melakukan proses kromatografi lempeng KLT yang digunakan sebagai alat untuk pemisahan ini diletakkan miring dengan derajat kemiringan sekitar 30⁰. Apa fungsi diletakkannya lempeng tersebut dengan kemiringan 30⁰?